产品货号：
MT0181
中文名称：
Benzonase核酸酶残留检测试剂盒
英文名称：
Benzonase Nuclease detection kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒基于荧光探针的Benzonase核酸酶残留检测方案，成功避开以上缺点，实现了高重复性、高准确度、高灵敏度检测。在无Benzonase核酸酶的样品中，该探针是稳定存在的，不会产生荧光信号；含有核酸酶残留的样品中，核酸酶可将荧光标记的DNA探针切割，从而产生逐渐增强的荧光信号。该方法可检测1.5～50ng/ml的核酸酶残留，操作简单，只需加入Benz Detection Solution和待检样品，在定量PCR仪上15min内即高准确度完成检测。该制品仅限用于我公司的Benzonase核酸酶（MT0068、MT0169、MT0170、MT0171）检测，其它Benzonase核酸酶制品，可能不适用，无法提供数据支持。
Benzonase核酸酶可高效降解任何形式的核酸，广泛用于蛋白等生物制品中核酸的去除。在处理过的生物制品中，可能存在微量Benzonase残留，这些微量残留会对后续生物制品的应用造成一定的影响。生物制品中Benzonase的残留量是衡量生物制品质量的重要指标之一。目前，Benzonase核酸酶残留检测多基于免疫吸附ELISA的检测方法，由于其方法自身的限制，测量并不准确，主要体现在以下方面：
储存：置于-20℃，可保存6个月，-80℃可保存18个月。
一、准备工作
二、检测操作
三、数据处理
数据处理中的注意事项：
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Benzonase核酸酶可高效降解任何形式的核酸，广泛用于蛋白等生物制品中核酸的去除。在处理过的生物制品中，可能存在微量Benzonase残留，这些微量残留会对后续生物制品的应用造成一定的影响。生物制品中Benzonase的残留量是衡量生物制品质量的重要指标之一。目前，Benzonase核酸酶残留检测多基于免疫吸附ELISA的检测方法，由于其方法自身的限制，测量并不准确，主要体现在以下方面：
- 检测抗体的亲和性能差异大，受环境影响大；
- 检测抗体的非特异性交叉反应；
- 生物制品本身蛋白浓度差异，造成的亲和吸附差异。
| 组分 | 规格 |
| 2×Benz Detection Solution | 1mL |
| 标准品A（25ng/ml） | 100μL |
| 标准品B（12.5ng/ml） | 100μL |
| 标准品C（6.3ng/ml） | 100μL |
| 标准品D（3.1ng/ml） | 100μL |
| 标准品E（1.5ng/ml） | 100μL |
| 样品稀释液 | 1.5mL |
储存：置于-20℃，可保存6个月，-80℃可保存18个月。
一、准备工作
- 由于Benzonase核酸酶消化迅速，在进行检测操作前务必将定量PCR仪的程序、样品编号提前设置完毕，检测操作完成后立即上机检测。
- 所有试剂，室温融化待用，实验完成后所有试剂再放置于-20℃或-80℃保存。
二、检测操作
- 样品准备
首次检测，可将待检测样品用样品稀释液稀释2倍、5倍、10倍后备用。稀释倍数取决于样本中Benzonase核酸酶的残留水平。 - 荧光定量PCR仪设置
关掉定量PCR仪的热盖功能，反应体积40μL。 Step 1 37℃ 10s 40 cycles Step 2 37℃ 20s FAM通道收集信号
定量PCR仪的热盖功能设置，不同机型可能不同，如不熟
悉设置功能，可联系设备供应商询问。 - 加样操作
- 在每一个0.2mL EP管底部（建议采用8联管或96孔板）加入20μL标准品或待检测样品（见实验排表1）。
- 所用样品加完后，快速的在每个样品中加入20μL 2×Benz Detection Solution，盖上管盖或膜。手腕用力将样品甩至管底。（本步操作请尽可能快，通常45s内完成，缓慢的操作，将影响检测结果准确性），然后迅速将检测样品放置PCR仪上运行。
表1：实验操作工作表管号 用途 用量 用途 管1 样品稀释液 20μL 阴性对照 管2 标准品A（25ng/ml） 20μL 标准曲线 管3 标准品B（12.5ng/ml） 20μL 标准曲线 管4 标准品C（6.3ng/ml） 20μL 标准曲线 管5 标准品D（3.1ng/ml） 20μL 标准曲线 管6 标准品E（1.5ng/ml） 20μL 标准曲线 管7 检测样品原液 20μL 浓度测定 管8 检测样品稀释2倍产物 20μL 浓度测定 管9 检测样品稀释5倍产物 20μL 浓度测定 管10 检测样品稀释10倍产物 20μL 浓度测定
三、数据处理
- 读取荧光信号值
该方案不同于标准定量PCR的数据处理方法，并不是去读取相同荧光值下的Ct值，而是读取在固定时间点的荧光信号（对数形式）。通常可读取5min（Ct10）~10min（Ct30）之内的数值，通常读取8min时间点的荧光信号值，即Ct16的荧光信号值。以下为使用BioRad-Opticon2机型进行检测的结果。
表2：检测结果管号 用途 荧光值 管1 样品稀释液 ---- 管2 标准品A（25ng/ml） 0.553 管3 标准品B（12.5ng/ml） 0.37 管4 标准品C（6.3ng/ml） 0.221 管5 标准品D（3.1ng/ml） 0.09 管6 标准品E（1.5ng/ml） 0.041 管7 检测样品 X - 根据标准品荧光信号值制作标准曲线
采用Excel进行标准曲线制作，采用幂函数，X轴为荧光信号值，Y轴为标准品浓度。
- 计算检测样本中Benzonase含量
根据标准曲线中的计算公式，将检测样品的荧光值(x轴)换算成Benzonase核酸酶残留量（ng/ml，y轴）。
Benzonase含量(y)=稀释倍数×1.6897e5.1296x
数据处理中的注意事项：
- 通常样本中Benzonase核酸酶残留量低于标准品F(1.5ng/ml)时，无法检出。报告形式为Benzonase核酸酶残留量<1.5ng/ml。
- 检测样品稀释后产物的荧光值仍然高于标准品A（25ng/ml）的荧光信号值，则需要将样本继续稀释后再进行检测。
- 不同的荧光PCR机型，可能在数据表现形式上存在差异，但原则不变，原理为短时间内的荧光增加量代表Benzonase核酸酶含量。
- 如果您对数据处理比较疑惑，可将结果发送至我处，有我处协助数据处理。
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